无信号 在检测之前,转印膜在贮藏过程中发 生蛋白降解 二抗选择错误 曝光时间太短 抗原上样量不足 抗原可能被破坏 检测系统 一抗的亲和力较低 化学发光底物已丧失活性。 已从膜上剥离抗体并再次杂交。 处理方法 使用新转的膜进行实验。 检查是否使用适当的二抗。 增加曝光时间。 在凝胶上载入更多的抗原,或在载入之前使用超滤管浓缩样品, 或使用免疫沉淀,以增加凝胶中的目标蛋白量。 检查确保电泳处理未破坏抗原性。 增加(和优化)一抗的浓度和培养时间、温度。上海益启生物的抗体询价联系方式。奉贤区Calbiochem抗体抗体商家
模塞只器生产厂家说明书,校准Luminex仪器,至少每周一次或在温度变化3℃时校准。 一些Luminex仪器要求与试剂盒方案中所述不同的门)设置。使用仪器默认设置。 检查试剂盒说明书中正确的微珠区域或分析物选择。 含有机溶剂的样品,或如果样品为高粘性,应根据需要进行稀释或透析。PMimeLuminex只器4次,以除去气泡;如果有任何残留酒精或消毒液,用酒精或消毒液或水洗涤4次 在所有解育步理中,保持微孔板和微珠混合物用果盖或铝培覆盖。加入适当的检测执体并继线t。金山区标签抗体抗体代理价上海买Merck抗体哪家靠谱?
例如,磷酸特异性抗体可能只与活化的磷酸化蛋白发生反应。如果您的蛋白定位在胞内,则必须对细胞进行裂解。流式细胞实验可能要选择识别细胞表面分子的抗体。如果您的蛋白有三级结构,且掩盖了抗原表位,则必须对样本进行变性,因为有些抗体无法识别自然状态的蛋白。一些抗体只在冷冻或非固定组织中起效,而有些抗体只对经抗原修复后的石蜡切片起效。 目标蛋白的物种来源 比较好选择明确标有目标蛋白种属的抗体。参考抗体说明书或网站信息。
问题 可能的原因 处理方法 印迹上出现条纹 在凝胶的蛋白负荷过量。 准确测量蛋白浓度,载入较少的蛋白。 印迹有污染或模糊 凝胶平衡不当,或在实验过程中收缩 检查凝胶平衡时间。 采用丽春红S染色时, 转膜无效 转膜时,小心除去气泡。 印迹染色较差 确保在电转过程中因为温度过高而产生气泡或凝胶/膜变形 采用丽春红S染色时, 在转膜过程中蛋白没有转移 检查设备(转膜盒、盒盖、电源)。 印迹没有染色 检查在转膜过程中凝胶和膜的顺序是 确保膜位于凝胶的右侧。 否正确益启生物是Merck抗体的代理商。
在解育过程中,检查密封盖与平板的接触情况。确保样品所用的稀释倍数在数据计算范围内。认真遵守产品说明书中的指示(第育时间、稀释等)。 确保样品根据建议的样品操作抽提、配制和贮藏(聚丙烯试管,澄清样品的贮戴温度为-20℃)。 多因子免疫检测法(Multiplex) 多因子检测是在一次分析中分析多个靶标蛋白的方法。它是生物标记物筛选和蛋白分析的创新技术,它使研究人员能够同时考察多重细胞间或细胞内的总蛋白或磷酸化蛋白,这些蛋白涉及细胞、组织或有机体的功能。正规科研抗体品牌零售代理商家。奉贤区Calbiochem抗体抗体商家
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叠氮化钠可通过某些偶联方法干扰多种生物实验。因此,进行此类实验时比较好使用离心透析过滤法、透析法或凝胶过滤法除去叠氮化钠,或使用无叠氮化物的抗体。注意:叠氮化钠有毒。对于所有实验室试剂,处理注意事项均请查阅“材料安全性数据表”(MSDS)。抗体为相对稳定的蛋白,能够抵抗较广范围的温和变性条件。当按照生产商的建议条件正确保存时,抗体可保持稳定达数年。 大多数情况下,抗体保存在-20℃时可不损失其结合能力。 比较好避免在无霜冰箱中保存抗体。奉贤区Calbiochem抗体抗体商家
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